Production d'anticorps monoclonaux

Les anticorps monoclonaux sont spécifiques par rapport à un épitope unique sur l'antigène, à la différence des anticorps polyclonaux, qui sont un mélange d'anticorps contre plusieurs épitopes d'un antigène. Cette spécificité des anticorps monoclonaux permet aux chercheurs de rechercher cet épitope même lorsque les modifications de cet épitope sont légères, parfois limitées à la modification d'un seul acide aminé. Un avantage majeur des anticorps monoclonaux, c'est qu'étant cultivés à partir d'un hybridome ou d'une lignée cellulaire recombinante, on pourra obtenir une quantité illimitée de ces anticorps, présentant la même spécificité et structure.

Labcorp utilise deux technologies différentes pour cultiver des anticorps monoclonaux : des hybridomes et le clonage de cellules B. Pour la technologie par hybridomes, les rongeurs sont immunisés avec l'antigène et lorsqu'une réponse immunitaire suffisante est détectée, les cellules produisant des anticorps sont fusionnées avec une lignée cellulaire de myélome et criblées. Sinon, dans le clonage des cellules B, les splénocytes d'animaux immunisés sont criblés et les gènes des chaînes lourdes et légères sont clonées et exprimées à partir de certaines cellules B. Ces deux technologies permettent de cultiver une quantité presque illimitée d'anticorps avec des propriétés identiques.

Culture d'hybridomes

• Espèces hôtes de rongeurs
• Splénocytes et/ou ganglions utilisés pour la fusion
• Différentes procédures de fusion comme le polyéthylène glycol (PEG) ou l'électrofusion

Clonage des cellules B

• Pratiquement toutes les espèces hôtes
• Isolement des cellules B spécifiques aux antigènes par FACS
• Clonage des gènes des chaînes lourdes et légères
• Expression dans les vecteurs mammifères et culture de cellules stables

Purification et caractérisation des anticorps

• À plus vaste échelle
  • Méthodes par ascites ou in vitro
  • Tests de mycoplasmes, isotypage
• Mise en banque/stockage des lignées cellulaires des hybridomes
• Transfection transitoire des vecteurs mammifères